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碱裂法提取DnA的原理

碱裂解法是提取质粒的最常用也最有效的方法,是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异达到分离目的.原理:高pH使质粒DNA和染色体DNA变性,同时沉淀蛋白质.再将pH值调至中性,质粒DNA较小,很容易复性成双链.而染色体

现在质粒提取无论手提还是试剂盒,其根本原理大多还是碱裂解法:当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变性

现在质粒提取无论手提还是试剂盒,其根本原理大多还是碱裂解法:当菌体在NaOH和 SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变

操作步骤: 1、细菌的收获:将菌液倒入合适的离心管中,8000g离心5分钟,弃上清,并在吸水纸上倒置离心管使上清全部流尽. 2、将细菌沉淀重悬于10ml溶液I中. 溶液I:50mmol/L葡萄糖,25mmol/LTrisCl(pH8.0),10mmol/LEDTA(pH8.0)

1浓度过高无法正常电压.2提取过程因为某些因素使DNA降解

RNA 对碱不稳定,在提取质粒时,RNA都降解成小片段,质粒电泳时跑在最前面的就是RNA条带.

碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法,其基本原理为:当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,当加入中和液后,质粒DNA分子能够迅速复性,呈溶解状态,离心时留在上清中;蛋白质与染色体DNA不变

碱裂解法只能提取质粒,因为质粒是环形双链比较好恢复,而基因组就无法复性了. 基因组DNA只能用表面活性剂法.

因为真核细胞DNA上有蛋白质结合,如果用碱裂解法就会把DNA与蛋白质一起沉淀下去,无法分离出细胞核DNA!碱裂解法提取质粒DNA,原理是细胞内蛋白质在沉淀的过程中会把大的DNA分子一起沉淀下去,质粒DNA由于较小,不会被沉淀而进入上清液,因而可以通过离心将其分离出来!然而真核DNA与组蛋白紧密结合,无法用碱裂解法提取出来!

现质粒提取论手提试剂盒其根本原理碱裂解:菌体NaOH SDS溶液裂解蛋白质与DNA发变性加入液质粒DNA能够迅速复性呈溶解状态离留清;蛋白质与染色体DNA变性 呈絮状离沉淀 进步质粒DNA获取手提经苯酚、氯仿抽提RNA酶消化乙醇沉淀 等简单步骤除残余蛋白质RNA及盐试剂盒则基础使用DNA吸附柱吸附质粒DNA洗脱质粒 评价:一通琼脂糖电泳检查所获质粒(准确需酶切)细菌基组DNARNA污染及质粒断裂少同根据marke量品进行致浓度定量; 二通紫外光光度计测定品OD二吧0OD二陆0计算其比值衡量品纯度经验值:纯DNA:OD二陆0/OD二吧0≈一.吧(>一.9,表明RNA污染;

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